[核酸采样液一般为多少毫升]关于印发新冠病毒核酸10合1混采检测技术规范的通知

有关下发新冠病原体多肽10合1混采检验技术标准的通告

共管共管监督机制医疗保健发〔2020〕352?号

各县、省、省辖市及新疆军区应付新冠肺结核禽流感共管共管监督机制（工作组、司令部）：

为辅导各县市搞好新冠病原体混采检验组织工作，更进一步提高新冠病原体多肽检验潜能和组织工作效率，全面落实四早明确要求，有效率满足用户禽流感常态化防控组织工作市场需求，我们组织制订了《新冠病原体多肽10合1混采检验技术标准》。现下发给你们，附注使用。

中华人民共和国国务院应付新式冠状病原体肺结核禽流感共管共管监督机制医疗保健抢救组

2020年8月17日

（重要信息申明形式：积极主动申明）

新冠病原体多肽10合1混采检验技术标准

为全面落实中华人民共和国国务院应付新冠病原体感染肺结核禽流感共管共管监督机制《有关搞好新冠肺结核禽流感常态化防控组织工作组织工作的辅导意见建议》（国发明者电〔2020〕14号）以及《有关大力大力推进大力推进新冠病原体多肽检验的实施意见建议》（共管共管监督机制综发﹝2020﹞181号）有关明确要求，辅导各县市新冠病原体混采检验组织工作，更进一步提高多肽检验潜能和组织工作效率，特别针对新冠病原体多肽10合1混采检验（10-in-1 test）技术（孔颖草收集自10人的10支拭子子集于1个收集混合气体进行多肽检验的方法），制订本规范化。

一、样本收集医用技术标准

（一）病原体收集管。

管帽和瓶式应为乙烯基织物，螺旋形口可密闭，较松适当。瓶式透明化，IntelliTone度好。体外圆柱体（14.8±0.2）mm×（100.5±0.4）mm, 管帽圆柱体（15.8±0.15）mm,度（12.5±0.5）mm。耗电量企业专题组10 ml，外加6ml胍盐或其他有效率病原体cccDNA剂的留存液。留存液应暗含更易检视、识别的色调（如紫色），并保持一定的资金面，方便快捷采样。

（二）收集拭子。

宜选用聚酯、尼龙等非棉质、非藻酸钙织物的拭子，且柄部为非木质材料。折断点位于距拭子头顶端3cm左右，更易折断。

二、收集地点明确要求

选择空旷、通风良好的场地作为大规模人群筛查集中收集地点。根据原有场地条件，划分为等候区、收集区、缓冲区和临时隔离区，有效率分散待检人员密度。应设置急救设备备用。

（一）等候区。

设置人行通道，同时设置一米线保证等候人员的防护安全。根据天气条件配备保温、降温，遮阳、遮雨等设施。老年人、儿童、孕妇和其他行动不便者优先收集。

（二）收集区。

根据气候条件，配备帐篷、冷/暖风扇、适量桌椅，保证医护人员在相对舒适环境下组织工作。配备收集用消毒用品、拭子、病原体收集管，并应为受检人员准备纸巾、呕吐袋和口罩备用。标本如无法及时运送至实验室，需准备4℃冰箱或低温留存箱暂存。应制订防止病原微生物扩散和感染的应急预案。

（三）缓冲区。

空间应相对密闭，可供收集人员更换个人防护装备，放置与采样点规模相匹配的防护用品、收集用消毒用品、拭子和收集管，户外消杀设备。

（四）临时隔离区。

用于暂时隔离在收集过程中发现的疑似患者或高危人群。

三、收集流程

（一）标识及重要信息登记。

1.登记流程。组织工作人员在收集前分配10个受检者为一组，收集前收集并登记受检者相关重要信息（包括姓名、性别、身份证号、联系电话、收集地点、收集日期和时间），按照组别进行收集管编号。

2.登记明确要求。推荐使用身份证读卡器、二维码条码等重要信息化手段关联受检者重要信息，提高重要信息读取组织工作效率和准确性。如不具备重要信息化条件，应提前登记《新冠病原体多肽10合1混采检验登记表》（见附件，以下简称混采登记表）。纸质登记表随标本送检前应备份存档于收集点所在社区，便于及时追溯受检者。

（二）收集方法。

被收集人员头部微仰，嘴张大，发啊音，露出两侧咽扁桃体，收集人员将拭子越过被收集人员舌根，在两侧咽扁桃体稍微用力来回擦拭至少3次，然后在咽后壁上下擦拭至少3次。操作完毕后，将拭子头置入混合气体、拭子折断点置于管口处，稍用力折断使拭子头落入收集管的液体中，弃去折断后的拭子杆，旋紧管盖，将收集管置于稳定的置物架上。每例收集后收集人员均应进行手消毒。

（三）混合拭子。

依照上述收集方法依次收集其余9支拭子，将完成收集的拭子放入同一收集混合气体，动作轻柔，避免气溶胶产生。连续收集10支拭子以后，旋紧管盖，防止溢洒。如收集管内拭子不足10支，应搞好特殊标记并记录。

四、标本送检

（一）核对重要信息。

核对收集管标签与混采登记表重要信息，确保准确完整，编号一致。

（二）标本放置明确要求。

将核对后的收集管放入透明化塑料密闭袋（一层容器）中并封严袋口，用75%乙醇喷洒密闭袋外部。将密闭袋放入二层容器（可选内配适量吸湿材料的包装盒或双层医用垃圾袋），密闭后用75%乙醇喷洒消毒。将二层容器放入具有生物危害标识的专用标本转运箱（推荐使用符合《危险品航空安全运输技术细则》A类物品运输UN2814标准的转运箱），二层容器和转运箱之间应放置降温凝胶冰袋。二层容器应固定在转运箱中，保持标本直立。密闭转运箱后，使用75%乙醇喷洒消毒，转运箱表面洁净无污染。

（三）标本转运明确要求。

标准转运箱应由专门标本运送人员负责运送。标本应在收集后2—4小时内送至实验室。混采登记表放入独立密闭袋，随转运箱一同转运。不能立即送检的，应配备专门的冰箱或冷藏箱留存，并搞好标本接收、留存登记。标本收集后24小时内可置于4℃留存。

五、实验室接收

（一）标本签收。

运送和接收人员应对标本进行双签收。接收人员检查混采登记表是否填写完整，被检者重要信息是否可追溯，转运箱、二层容器有无破损。

（二）标本打开。

应在生物安全二级实验室核心区打开转运箱，取出二层容器。在生物安全柜中打开二层容器，用75%乙醇喷洒或擦拭消毒后，取出密闭袋，用75%乙醇试剂喷洒或擦拭消毒，并检查是否密闭完好。

（三）标本检查。

核对收集管标签与混采登记表重要信息是否一致。取出收集管，检查管壁是否有破损、管口渗漏等，确认无破损、渗漏后用75%乙醇喷洒或擦拭消毒。如有破损、渗漏，应立即停止操作，用吸水纸覆盖后使用0.55%含氯消毒剂进行消毒处理，搞好不合格登记后销毁。

（四）标本留存。

不能及时检验的标本放入专用冰箱留存。24小时内检验的标本可置于4℃留存。24小时内无法检验的标本应置于-70℃或以下温度留存。如无-70℃留存条件，则于-20℃暂存。避免标本反复冻融。设立专库或专柜留存标本，双人双锁管理。

（五）转运容器移出。

使用后的二层容器内外壁经75%乙醇擦拭消毒后移出生物安全柜，实验结束后使用紫外灯照射消毒。

六、标本检验与质量控制

（一）标本检验。

实验室接收标本后，应立即进行检验。检验前进行充分震荡洗脱，之后进行多肽提取及扩增实验。推荐选用包含特别针对新冠病原体开放读码框1ab（open reading frame 1ab，ORF1ab）和核壳蛋白（nucleocapsid protein，N）基因区域的试剂。若使用多肽提取仪，多肽提取试剂应与多肽提取仪配套使用。扩增试剂盒应选用国家药品监督管理局批准暗含注册文号的试剂盒。建议选择检验限低、灵敏度高的检验试剂盒。

（二）检验质控。

每批检验至少有1份弱阳性质控品（第三方质控品，通常为检出限的3倍左右）、2份阴性质控品（试剂盒自带阴性质控品）和1份空白对照品（生理盐水或焦碳酸二乙酯处理水）。空白对照品应开盖放置在提取仪或操作台面上过夜，用于环境污染评估。质控品随机放在临床标本中，参与从提取到扩增的全过程。

（三）质控结果。

弱阳性质控品测定为阳性，阴性质控品全部测定为阴性，视为在控。反之，则为失控，不可出具检验报告，应立即分析原因，必要时重新检验标本。

七、检验结果处理

新冠病原体多肽定性检验报告应包括检验结果（检出/阳性、未检出/阴性）、方法学、检出限等。

（一）结果判断。

依据所用扩增试剂说明书，判断检验结果为未检出/阴性或者检出/阳性。若结果处于灰区，建议作为混采阳性结果进行复核。

（二）阳性结果复核。

1.混采检验结果为阳性、灰区或单个靶标阳性，通告相关部门对该混采管的10个受试者暂时单独隔离，并重新收集单管拭子进行复核。

2.复核单管多肽检验如均为阴性，则按照阴性结果回报。暂时隔离人员即解除隔离；如检验结果阳性，按程序上报。

八、检验后样本处理

检验后的标本应尽快就地销毁，搞好高压灭菌质量监控和消毒、销毁记录。

九、技术人员基本明确要求

采样人员和检验人员明确要求应满足用户《医疗保健机构新式冠状病原体多肽检验组织工作手册（试行）》明确要求。

十、生物安全防护

（一）标本收集和运送人员。

对于收集低风险区域人群的收集者，采用二级生物安全防护。包括：一次性帽子、医用防护口罩（N95）、手套（必要时双层）、护目镜/面屏、隔离衣，鞋套（必要时）。标本运送人员采用一级生物安全防护，包括：医用外科口罩、乳胶手套、组织工作服，可戴医用防护帽。

（二）标本接收和检验人员。

标本接收人员应为多肽检验实验室经生物安全防护培训的指定人员，采用二级以上生物安全防护。生物安全防护标准可根据所从事组织工作的危险性进行区分。进行试剂准备和多肽扩增的组织工作人员采用二级防护。处理标本的人员必须严格遵照三级防护标准，包括：医用防护口罩或N95、单或双层乳胶手套（条件许可，可以不同色调）、面屏、护目镜、组织工作服外防护服、单或双层医用防护帽，手卫生。必要时双层口罩（外医用防护口罩，内N95）。

附件：新冠病原体多肽10合1混采检验登记表

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