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堇菜LAMP鉴别烟鼠

Herba taxilli商品及特征：?

LAMP是一类新式多肽扩充技术，采用4或6条能够辨识目的DNA上的6个Bokaro区域的引物，倚赖Bst DNA引物的强链分期付款特异性，在30~60分钟内DNA扩充可达109~1010倍。 LAMP检验方式分为多种，主要包括颜料法、硬水法、色谱法法以及目标公司最新开发的TaqMan萤光电极法。目标公司推出基于LAMP常用检验方式的硅粉LAMP检验通用烟鼠，该全系列为硅粉纺织品，相对于市售的固体型商品更为稳定，精确度更高，操作更为方便快捷，通常在30min内完成检验。

LAMP变黑扩充烟鼠主要包括：硅粉LAMP-HNB变黑扩充烟鼠、硅粉LAMP橙绿变黑扩充烟鼠、硅粉LAMP硬水扩充烟鼠和硅粉LAMP-TaqMan扩充烟鼠。其中 甲基硫醇蓝（HNB）是一类金属阳离子氯化物，HNB与镁阳离子紧密结合使化学反应管理体系如上所述色调为albus，随着化学反应的进行，Mg2+与分离出来的苄基根阳离子化学反应生成苄基镁结晶，甲基硫醇蓝失去了镁阳离子使管理体系色调转变成深蓝色，而未化学反应的管理体系则仍保持着albus ；而橙绿变黑颜料（OG Dye）则可与LAMP扩充乙醛紧密结合成明显的裸眼可见的萤光绿色，阴性化学反应则为黄色；硬水法则是由硬水仪检验或裸眼观察LAMP间歇性化学反应产生的苄基镁结晶而判断化学反应结论;而LAMP-TaqMan则是由萤光检验科学仪器动态分析化学反应而解译结论。本烟鼠具有以下特征：

1. 即开即用的2×LAMP MagicMix，A型含有红色色谱法放射源，扩充后能直接上样，不须要上样液。

2. 高Bokaro性，由于同时使用4-6条Bokaro引物，所以Bokaro性比PCR 更高。

3. 高扩充工作效率，扩充工作效率可达到10E9-10E10，比PCR敏捷一个量级，可检验到单复本的DNA分子。

4. 65℃左右绝热扩充，能不须要值钱的Sauxillanges仪。

5. 即开即用，包含了除引物和模版DNA外的所有成分，十分方便快捷。

6. 裸眼检验扩充结论，不须要高昂的色谱法、萤光PCR等科学仪器。

7. 本烟鼠足够50次20μL管理体系的LAMP扩充。

8. 提供扩充对照，便于在遇到困难时分析原因。

9. 本商品只能用于科研，不能用于临床。

规格及成分

注：本商品 A 型（100203A）中加入了专用示踪颜料。本商品 B 型（100203B）中没有加入示踪颜料。运输及保存：?低温运输，-20℃保存，有效期一年。

自备中间体 ：LAMP 模版、LAMP 引物、自备可见光颜料

使用方式?

1. 制备模版DNA：选用合适的方式制备模版DNA。

2. 配制自备的5×LAMP引物混合液。

先加超纯水或自备TE缓冲液将自备的以下6种（或4种）引物干粉稀释到母液浓度，然后在一新的离心管中按表中所列体积加入各种引物母液和超纯水，最后得到1mL的5×LAMP引物混合液，此混合液足够250次20μL管理体系的LAMP扩充。如果须要配制的5×LAMP引物混合固体积异于1mL，则各成分的用量请按比例调整。引物混合液能在-20℃放置2年。 在冰上融化2×LAMP MagicMix，混匀，稍离心。如果有N个样品，则在N+2个化学反应管中加入以下组份：注意：此步可加入自备的各种LAMP可视化颜料，这样化学反应结束后能根据化学反应液的色调变化或动态萤光强度变化来判断是否有扩充，不须要开盖，避免污染。如果加入了萤光颜料，则须要在萤光定量PCR仪上进行化学反应和动态检验。

4. 混匀，置于63℃保温60分钟。如果是在PCR仪中保温，必须加热盖。如果用金属浴或水浴保温，没有热盖，必须覆盖50μL的石蜡油，否则保温期间化学反应管理体系的水分会蒸发，影响化学反应工作效率。

5. 乙醛取扩充乙醛5 μL直接上样（本商品A含有红色色谱法放射源，不须要再加上样液，红色放射源的泳动速度相当于50bp的DNA）进行2-3%的琼脂糖凝胶色谱法，可见LAMP特征性色谱法图谱。

6. 结论分析：如果本烟鼠提供的阳性对照-引物混合物能够扩充而阴性对照不能扩出，则实验有效。如果阳性对照-引物混合物没有扩充出条带，则烟鼠的问题，请跟厂家联系。如果阴性对照（水作为模版）有扩充出条带，则说明LAMP样品或中间体有过去的扩充乙醛的污染，须要注意操作的规范性，如果不能解决，能重新设计引物扩充新的靶片段。也能使用不须要开盖的2×可视化LAMP MagicMix。

注意事项

1. 引物设计对成功扩充十分关键，尽量以保守区设计引物。

2. 引物至少主要包括F3/B3和FIP/BIP，加入环状引物F loop/B loop能使化学反应速度大大提高。

3. 应优化引物序列、GC含量和尽量避免二级结构。

4. LAMP扩充具有Bokaro性好、精确度高、时间快、不须要特殊科学仪器设备等优点。但太高的精确度使其比普通 PCR 扩充更为容易污染导致假阳性。因此，必须高度重视扩充乙醛的污染。常规措施主要包括严格的实验分区、使用萤光定量等不开盖检验方式。实验室一旦遭到污染，很难去除，最好重新设计引物扩充新的靶片段。

5. 要确证扩充的为目标DNA，能使用特定的限制性酶切和/或Southern杂交。

特别提示：本公司的所有商品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

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